HPLC eğitimi; cihazın yalnızca çalışma prensibini değil, doğru kolon ve dedektör seçimini, metot geliştirmeyi, sistem uygunluğunu ve sonuçların yorumlanmasını da kapsar. Bu rehber, eğitim sürecinde öğrenilmesi gereken temel cihaz bilgisini ve uygulama adımlarını bir araya getirir.
Teorik bilgiyi interaktif simülasyonlarla pekiştirmek için HPLC Toolkit uygulamalarını inceleyebilirsiniz.
- Enjeksiyon: Numune mobil faz akışına enjekte edilir
- Pompalama: Pompa mobil fazı yüksek basınçta (50-400 bar) kolona iter
- Ayırma: Bileşenler kolon içinde sabit faz ile etkileşerek ayrılır
- Deteksiyon: Kolondan çıkan bileşenler detektör tarafından algılanır
| Mod | Sabit Faz | Mobil Faz | Kullanım |
|---|
| Ters Faz (RP) | Non-polar (C18) | Polar (su-ACN) | En yaygın (%80+) |
| Normal Faz (NP) | Polar (silika) | Non-polar | Lipit analizi |
| İyon Değişim | İyonik | Tampon | Protein, amino asit |
| Boyut Ayrışım | Gözenekli | Tampon | Polimer karakterizasyon |
| Bileşen | Fonksiyon |
|---|
| Çözücü Rezervuarı | Mobil faz saklama |
| Degasser | Gaz giderme |
| Pompa | Yüksek basınçlı akış |
| Enjektör | Numune enjeksiyonu |
| Kolon | Kromatografik ayırma |
| Dedektör | Sinyal algılama |
| Veri Sistemi | Analiz ve raporlama |
| Dedektör | Prensip | Uygulama |
|---|
| UV-Vis | Işık absorbsiyonu | En yaygın |
| Floresan | Işık emisyonu | Yüksek hassasiyet |
| RI | Kırılma indeksi | Şekerler |
| MS | Kütle spektrometresi | Yapı belirleme |
- Uzunluk: 150-250 mm (analitik)
- İç çap: 4.6 mm (standart), 2.1 mm (UHPLC)
- Partikül boyutu: 3-5 µm (HPLC), <2 µm (UHPLC)
| Bileşen Türü | Önerilen Kolon |
|---|
| Orta-yüksek log P | C18 |
| Polar bileşenler | Polar embedded |
| Aromatikler | Fenil |
| Proteinler | C4, geniş gözenek |
| Özellik | HPLC | GC |
|---|
| Mobil Faz | Sıvı | Gaz |
| Numune | Non-uçucu, polar | Uçucu |
| Sıcaklık | Oda-80°C | 50-400°C |
| Detektör | UV, MS, RI | FID, MS |
- İlaç safsızlık analizi
- Stabilite testleri
- Kalite kontrol
- Vitamin analizi
- Katkı maddeleri
- Aflatoksin tespiti
- Terapötik ilaç izleme
- Hormon analizi
- Neonatal tarama
- Pestisit analizi
- PAH tespiti
- Su kirliliği
- Analiz hedefinin belirlenmesi
- Kolon ve mobil faz seçimi
- Gradient/izokratik optimizasyon
- Sistem uygunluk testi
- Metot validasyonu
