HPLC Nedir?
HPLC (High Performance Liquid Chromatography), karmaşık karışımlardaki bileşenleri yüksek basınç altında ayırma, tanımlama ve ölçme için kullanılan analitik kromatografi tekniğidir.
Çalışma Prensibi
- Enjeksiyon: Numune mobil faz akışına enjekte edilir
- Pompalama: Pompa mobil fazı yüksek basınçta (50-400 bar) kolona iter
- Ayırma: Bileşenler kolon içinde sabit faz ile etkileşerek ayrılır
- Deteksiyon: Kolondan çıkan bileşenler detektör tarafından algılanır
Ayırma Modları
| Mod | Sabit Faz | Mobil Faz | Kullanım |
|---|---|---|---|
| Ters Faz (RP) | Non-polar (C18) | Polar (su-ACN) | En yaygın (%80+) |
| Normal Faz (NP) | Polar (silika) | Non-polar | Lipit analizi |
| İyon Değişim | İyonik | Tampon | Protein, amino asit |
| Boyut Ayrışım | Gözenekli | Tampon | Polimer karakterizasyon |
Temel Bileşenler
| Bileşen | Fonksiyon |
|---|---|
| Çözücü Rezervuarı | Mobil faz saklama |
| Degasser | Gaz giderme |
| Pompa | Yüksek basınçlı akış |
| Enjektör | Numune enjeksiyonu |
| Kolon | Kromatografik ayırma |
| Dedektör | Sinyal algılama |
| Veri Sistemi | Analiz ve raporlama |
Dedektör Türleri
| Dedektör | Prensip | Uygulama |
|---|---|---|
| UV-Vis | Işık absorbsiyonu | En yaygın |
| Floresan | Işık emisyonu | Yüksek hassasiyet |
| RI | Kırılma indeksi | Şekerler |
| MS | Kütle spektrometresi | Yapı belirleme |
Kolon Seçimi
Kolon Parametreleri
- Uzunluk: 150-250 mm (analitik)
- İç çap: 4.6 mm (standart), 2.1 mm (UHPLC)
- Partikül boyutu: 3-5 µm (HPLC), <2 µm (UHPLC)
Sabit Faz Seçimi
| Bileşen Türü | Önerilen Kolon |
|---|---|
| Orta-yüksek log P | C18 |
| Polar bileşenler | Polar embedded |
| Aromatikler | Fenil |
| Proteinler | C4, geniş gözenek |
Size Uygun Eğitimi Bulun
Bireysel mi yoksa kurumsal mı eğitim arıyorsunuz?
HPLC vs GC
| Özellik | HPLC | GC |
|---|---|---|
| Mobil Faz | Sıvı | Gaz |
| Numune | Non-uçucu, polar | Uçucu |
| Sıcaklık | Oda-80°C | 50-400°C |
| Detektör | UV, MS, RI | FID, MS |
Uygulama Alanları
Farmasötik
- İlaç safsızlık analizi
- Stabilite testleri
- Kalite kontrol
Gıda
- Vitamin analizi
- Katkı maddeleri
- Aflatoksin tespiti
Klinik
- Terapötik ilaç izleme
- Hormon analizi
- Neonatal tarama
Çevre
- Pestisit analizi
- PAH tespiti
- Su kirliliği
Metot Geliştirme Adımları
- Analiz hedefinin belirlenmesi
- Kolon ve mobil faz seçimi
- Gradient/izokratik optimizasyon
- Sistem uygunluk testi
- Metot validasyonu
![ELISA Nedir? Çalışma Prensibi ve Uygulama Alanları [{YEAR}]](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fimages.unsplash.com%2Fphoto-1434030216411-0b793f4b4173%3Fw%3D800%26q%3D80&w=3840&q=75)
![FPLC Nedir? Protein Saflaştırma Kromatografisi [{YEAR}]](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fimages.unsplash.com%2Fphoto-1454165804606-c3d57bc86b40%3Fw%3D800%26q%3D80&w=3840&q=75)
![SDS-PAGE Nedir? Protein Elektroforezi Rehberi [{YEAR}]](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fimages.unsplash.com%2Fphoto-1516321318423-f06f85e504b3%3Fw%3D800%26q%3D80&w=3840&q=75)
